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【答案】D

【解析】

試題分析：將微生物的接種工具,，如接種環(huán)、接種針或其他的金屬用具,，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒,，可以迅速徹底地滅菌，A正確,；接種環(huán)必須冷卻后,，才可以伸入菌液中蘸取一環(huán)液，否則會燒傷或燒死微生物,，B正確,；蘸取菌液和劃線要在火焰旁進行，防止空氣中的雜菌,，C正確,；劃線時要避免最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)線連． 因為最后一區(qū)是細菌最稀少的，而第一區(qū)是細菌最致密的,，如果連在一起則有可能影響單個菌落的分離效果,，D錯誤。