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答案

PCR反應(yīng)進(jìn)行的條件：引物(PCR引物為DNA片段,，細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制的引物為一段RNA鏈）,、酶,、dNTP、模板和緩沖液（其中需要Mg2+）,。

解析

引物有多種設(shè)計方法,，由PCR在實驗中的目的決定，但基本原則相同,。PCR所用的酶主要有兩種來源：Taq和Pfu,，分別來自兩種不同的噬熱菌。其中Taq擴(kuò)增效率高但易發(fā)生錯配,。Pfu擴(kuò)增效率弱但有糾錯功能,。所以實際使用時根據(jù)需要必須做不同的選擇。

知識點

PCR的特點：

1,、靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,，能將皮克(pg=10-12）量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克（μg=-6）水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞,；在病毒的檢測中,，PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位）；在細(xì)菌學(xué)中最小檢出率為3個細(xì)菌,。

2,、簡便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,，一次性地將反應(yīng)液加好后,，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng),。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,，不一定要用同位素，無放射性污染,、易推廣,。

3、純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,，DNA 粗制品及RNA均可作為擴(kuò)增模板,?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液,、洗嗽液,、毛發(fā)、細(xì)胞,、活組織等DNA擴(kuò)增檢測,。