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實驗室工作規(guī)程 實驗室工作要求篇一

1.做好實驗室的安全工作，是教學和科研工作的保證,。各實驗室必須牢固樹立“安全第一”的觀點，加強安全制度教育,，重視安全技術工作,。各二級學院（直屬學部）分管實驗室工作的院長負責此項工作,。

2.每個實驗室設一名兼職安全員,。安全員對不符合規(guī)定的操作或不利于安全的問題,，有權(quán)提出詢問；對不聽勸告或有礙安全的人,，有權(quán)停止其操作。

3.各實驗室根據(jù)各自特點,，建立安全操作規(guī)程和防火,、防盜制度，要落實到人,，明確職責。定期填寫《實驗室安全檢查記錄》,。

4.為確保實驗室工作人員的安全與身心健康,，實驗室根據(jù)各自情況,，對涉及易燃物,、易爆物,、煙,、毒、粉塵,、有毒氣體、放射性物質(zhì),、高頻電流,、超高電壓、大幅度振動,、強烈持續(xù)噪音、高溫,、高壓,、熱輻射、極強光閃爍等各種場合或有關設備,，制定出嚴格的操作規(guī)章制度，并采取相應的勞動保護措施,，由安全員負責監(jiān)督執(zhí)行,。

5.由于官僚主義、違章操作、玩忽職守,、忽視安全而造成失火、被盜,、嚴重污染,、中毒、人身重大傷害,、精密貴重設備儀器嚴重損壞等重大事故時，實驗室要保護好現(xiàn)場,，并立即向二級學院（直屬學部）、學校報告,。學校對事故責任人作出嚴肅處理,，處理結(jié)果按規(guī)定逐級上報，對隱瞞不報及縮小或擴大事故真相者,，應予嚴肅處理。

6.實驗室使用的化學藥品,、易燃,、易爆和劇毒危險品,，要按規(guī)定設專用庫房存放,，并指定專人（兩人）妥善保管。領用時要嚴格把關,，嚴密手續(xù)；必須經(jīng)實驗室主任簽署意見,，方可領用。同時，要規(guī)定有專人使用,，要有可靠的安全防范措施。

7.各種安全防范措施要準備齊全,，各種安全規(guī)章制度要張貼到墻，各種安全設施不準任何人以任何借口借用或挪用,。

8.學生初次進實驗室做實驗前，實驗指導人員必須宣講安全制度,，不經(jīng)安全規(guī)章教育者，不得進入實驗室,。

9.每學期，各二級學院（直屬學部）分管院長應組織對實驗室安全工作情況進行一次全面性的認真檢查,。查出的不安全隱患要采取措施消除。各部門要各負其責,，對應該解決的問題要限期解決，對一時解決不了的問題,，有關部門要采取臨時防范措施,。

實驗室工作規(guī)程 實驗室工作要求篇二

實驗室安全環(huán)保工作規(guī)范

實驗室是企業(yè)進行科技研發(fā)的重要基地,，為搞好實驗室安全環(huán)保工作,，優(yōu)化科技園公共安全和環(huán)境，特制定本工作規(guī)范,。

一 總 則

第一條：實驗室安全環(huán)保和衛(wèi)生工作，關系到從業(yè)人員生命安全和財產(chǎn)免遭損失的重大問題,，各企業(yè)和全體實驗室工作人員要樹立“預防為主，安全第一”的思想,，堅持“管研發(fā)必須同時管安全”、“誰主管，誰負責”的原則,，一級抓一級、層層抓落實,。在抓好技術研發(fā)的同時，必須定期檢查,，切實執(zhí)行各項安全環(huán)保管理制度。

第二條：實驗室安全環(huán)保和衛(wèi)生工作,，實行崗位責任制，分級負責管理,。各企業(yè)應加強對實驗室安全環(huán)保和衛(wèi)生工作的領導，明確責任人,，并定期對所屬人員進行安全環(huán)保和衛(wèi)生教育，完善安全生產(chǎn)“五本一卡”制度,，建立“三級教育”卡片，依靠群眾,，確保安全,。

第三條：各實驗室的安全環(huán)保和衛(wèi)生管理工作由實驗室主任（無實驗室主任的研發(fā)用房由課題組負責人）負責,，并設一名安全環(huán)保和衛(wèi)生督查員（兼職），協(xié)助實驗室主任開展安全環(huán)保和衛(wèi)生工作,，組織或?qū)嵤嶒炇野踩h(huán)保和衛(wèi)生教育,，依據(jù)相關規(guī)定制定和完善實驗室內(nèi)部的安全環(huán)保和衛(wèi)生管理制度,，督促進入實驗室的人員遵守安全環(huán)保和衛(wèi)生規(guī)定，檢查安全環(huán)保衛(wèi)生制度執(zhí)行情況,，發(fā)現(xiàn)問題及時整改，并對發(fā)生的安全,、環(huán)保事故進行調(diào)查處理及上報。第四條：安全環(huán)保和衛(wèi)生工作人人有責,。實驗室主任要負起健全實驗室安全工作制度、加強實驗室工作管理,、定期檢查不安全因素的責任。實驗室要嚴格用房負責人制度,，做到每間用房均有用房負責人，并明確用房負責人職責,。用房負責人職責：負責本室的水、電,、煤氣、蒸汽,、門、窗等設施的每日檢查,，發(fā)現(xiàn)問題及時報修,。落實衛(wèi)生值日,，做好室內(nèi)環(huán)保安全及設備物資保管和室內(nèi)一般儀器設備的日常檢查維護，發(fā)現(xiàn)隱患,，及時整改。負責落實本室危險作業(yè),、危險設備安全操作規(guī)程和易燃、易爆,、有毒、有害化學物品的安全管理,，以及廢棄物（藥）品的安全處臵。負責對室內(nèi)其他成員管理工作,，檢查督促實驗室各項制度落實及本實驗室周圍環(huán)境管理。防止各種事故發(fā)生,。

第五條：新進員工進入實驗室之前，必須組織進行安全意識和安全知識的“三級”安全教育,，同時建立安全教育卡片檔案。凡未經(jīng)過“三級”安全教育的員工不準進實驗室,，經(jīng)過安全教育，考核不合格的員工不得單獨進實驗室做實驗,。

任何人不得在實驗室嬉鬧、不得在儀器室,、貯藏室和實驗場所吸煙，不得在實驗室燒飯菜和喝（酗）酒,、聚餐,。

第六條：在使用新工藝、新技術,、新設備，都應制定相應的安全制度,、操作規(guī)程、應急措施和防止污染環(huán)境等措施,，對操作人員進行訓練和安全技術教育后,，才能進行工作,。

第七條：實驗過程中發(fā)生異常情況時,，不會導致人身傷害和火災、爆炸等危險事故的,，屬于一般實驗，所使用的設備,、藥品由實驗人員按照日檢查制度，每天檢查確認安全和正確無誤后即可進行實驗 ,；實驗過程中發(fā)生異常時可能會發(fā)生火災、爆炸或人身傷害等危險事故的,，屬于危險性實驗，所使用的設備,、藥品及其實驗程序等必須經(jīng)實驗室主任檢查，確認安全和正確無誤并告知實驗人員后方可進行實驗,；在禁止煙火的實驗室里進行易燃易爆類實驗屬于特別危險的實驗，必須在實驗前向園區(qū)管理人提出書面申請,，經(jīng)園區(qū)批準并采取可靠的防范措施后方可進行實驗。

二 安全使用水,、電,、煤氣，做好防火管理

第八條：實驗室未經(jīng)園區(qū)批準,，不得擅自安裝使用火爐、煤氣爐,、開式電爐、電取暖器和大功率的電加熱器,，不得亂拉亂接電線。普通實驗樓內(nèi)禁止做高壓實驗,。

第九條：各類實驗室的結(jié)構(gòu)和設施必須符合有關規(guī)定，實驗室需要安裝水,、電、煤氣管道龍頭時,，應報園區(qū)審核同意后，由專門技術操作人員實施,，持證上崗。安裝煤氣管道必須由煤氣公司操作,。電線鋪設和電器設備安裝必須符合《低規(guī)》和實驗室安全管理的有關要求,，由電工規(guī)范施工。禁火場所動用明火,，需報消防部門批準，待采取有效的防范措施后,，方可進行。實驗室裝修或改變用途的必須符合消防安全要求,，并提前一周向園區(qū)申報消防審核，經(jīng)批準后方可進行裝修,。

第十條：電焊工,、氣焊工,、電工等特殊工種,，應經(jīng)過專門培訓，取得《上海市特種作業(yè)安全操作證》才能獨立上崗操作,。第十一條：由于目前電壓、水壓不夠穩(wěn)定,，部分電氣設備性能不夠完善，原則上除使用電冰箱外,，其他儀器設備在通電或通水時，必需有人值班,。人一旦離開則應及時切斷電源和水源。

第十二條：加強冰箱管理,，確保使用安全。非防爆電冰箱內(nèi)禁止存放易燃,、易爆、低沸點,、強腐蝕等藥品。所有冰箱禁止存放性質(zhì)相互抵觸的化學藥品和私人物品,。

第十三條：實驗室每天下班后要進行安全檢查，拉閘斷電,、關閉水源、關窗鎖門,，機電設備夜間運轉(zhuǎn)應留專人值班管理。

三 加強化學危險品管理

第十四條：各單位使用化學危險品時,，應根據(jù)使用情況購買最少數(shù)量,。實驗室領用化學危險品必須指定專人保管，存放地點必須符合安全要求,。并應配備適用的消防器材和防護用品。在可能發(fā)生化學灼傷的地方應設有常備水源和必要的中和劑,。

第十五條：使用（儲存）化學品應有標識和安全標簽，操作人員應掌握相應安全技術知識,。對儲存的化學危險品應定期檢查。安全標簽若脫落或損壞,，經(jīng)檢查確認后應及時補貼，確保安全,。性質(zhì)相互抵觸或滅火方法不同的藥品，不可共同存放,。對所保管的化學危險品，應定期核對帳物,，必須做到帳物相符，禁止物品流失,。

第十六條：根據(jù)消防有關規(guī)定，實驗室內(nèi)做實驗剩余的化學危險品總量不得超過5kg,，藥品貯藏室每柜的總儲量不得超過100kg。在實驗室內(nèi)嚴禁堆放超量易燃,、易爆等化學危險品，更不能存放與實驗無關的易燃,、易爆的危險品。必須嚴格禁止實驗室內(nèi)既是實驗場所,，又是危險品儲藏室的現(xiàn)象。化學品需要轉(zhuǎn)移或分裝到其他容器應標明其內(nèi)容,。

第十七條：實驗室存放易燃、易爆氣體鋼瓶不準與明火同室,，和電源插座,、開關也必須要保持至少大于2米以上的距離,，門口應有醒目禁火標志,。使用有毒的氣體鋼瓶應備有專用防毒面具,，放臵明處，并制定防泄漏的應急措施,。氣體鋼瓶停用時要關好氣閥。

第十八條：實驗室應備有必要的防火滅火專用器材,。除此以外，凡使用易燃,、易爆物品的實驗室還必須備有石棉布，放于明處,。經(jīng)常對有關人員進行工作安全使用化學品的教育和培訓，掌握必要的應急處理方法和自救措施,。

第十九條：對劇毒、易爆危險藥品的管理與使用,，必須嚴格執(zhí)行國務院2002年第344號令《危險化學品安全管理條例》及《華東理工大學化學危險品管理辦法》等規(guī)定,。

第二十條：購買劇毒,、易爆危險藥品必須是本單位在冊人員,，必須經(jīng)負責人簽字，報園區(qū)審核同意后，雙人購買,，雙人對該藥品的安全負有同等責任，如不按上述規(guī)定,，園區(qū)有權(quán)拒絕藥品進入實驗室。

第二十一條：劇毒,、易爆危險藥品必須雙人使用，用多少,，領多少，并做好應急預案和詳細使用記錄,。一般情況下，實驗室不得存放劇毒,、易爆化學品。如有特殊情況要將該藥品保存在實驗室,，必須具備安全儲存條件，并實行雙人,、雙鎖暫時保管。實驗結(jié)束后,，若還有余量，必須進行無害化處理,。第二十二條：嚴格執(zhí)行劇毒,、易爆危險藥品的管理制度,。嚴禁把劇毒,、易爆危險藥品帶出實驗室。

四 加強貴重物品的管理

第二十三條：對稀有金屬,、貴重物品,、儀器設備要登記注冊,，落實安全防盜措施，在使用過程中要堅持收,、發(fā)、領,、退制度。

第二十四條：領用貴重金屬材料必須由兩人同時領用,，用后廢渣、廢料要按規(guī)定妥善回收處理,。

第二十五條：對機密文件,、圖紙,、重要科研資料，要確定專人負責,，嚴格登記、保密,、傳遞使用手續(xù)。

五 加強壓力容器的安全管理

第二十六條：壓力容器必須按規(guī)定進行定期檢測,，凡未經(jīng)安全檢測，未取得安全合格證的（含新購臵的壓力容器）不能投入使用,。壓力容器的使用單位，應在操作過程中明確操作要求,，建立壓力容器管理與操作責任制。制定應急救援預案,，定期演練，并加強日常維護和保養(yǎng)。

第二十七條：壓力容器的操作必須嚴格按使用說明書進行,，不得違規(guī)操作。

第二十八條：若壓力容器的主要受壓元件發(fā)生裂縫,、變形、泄漏等危及安全現(xiàn)象時,，應馬上停止操作并及時采取應急措施。第二十九條：各種氣體鋼瓶要輕裝輕卸,。氧氣瓶禁油。有毒,、有害、易燃,、易爆氣體鋼瓶要關緊閥門，防止泄漏,。

第三十條：實驗室各種氣體鋼瓶的放臵應嚴格按照規(guī)定，設有固定裝臵,。鋼瓶周圍嚴禁明火與產(chǎn)生電火花的電氣。不準使用各類加熱器,。

第三十一條：各實驗室必須指定專人負責各類鋼瓶的申領和使用。專人保管,，專人使用。定室定點使用的各類易燃,、易爆、有毒氣體鋼瓶,，不準擅自更改存放地點。

第三十二條：因?qū)嶒炐枰褂靡兹?、易爆,、有毒氣體鋼瓶的同一現(xiàn)場,，同種氣體鋼瓶不得超過兩瓶。

六 儀器,、設備安全管理

第三十三條：實驗室儀器設備應按技術要求合理調(diào)試和使用。嚴格按有關技術資料（或使用說明書）維護保養(yǎng),，確保正常運行。

第三十四條：實驗室內(nèi)的儀器設備應備原配插頭,、插座。安裝調(diào)試時應檢查其規(guī)格,、質(zhì)量及連接情況，如不符合要求應及時更換或改正,。

第三十五條：儀器設備在安裝完畢擬通電之前，需兩人以上再次嚴格對照說明書,，確認無誤才能通電，并做好記錄以備檢查,。

第三十六條：大型貴重儀器及特種危險設備必須有專人負責。專管人員（維修人員）應具有一定的技術水平,，并保持相對穩(wěn)定，專管人員要建立與完善儀器設備安全操作制度,，并承擔相應的安全職責。

第三十七條：實驗室內(nèi)的烘箱,、冰箱,、電爐應作科研之用，不能挪作他用,。烘箱,、電爐要嚴格按其說明書及制度使用操作，且在使用過程中不準離開場所,。

第三十八條：烘箱,、冰箱,、電爐等電器設備周圍不得堆放化學危險品，特別是易燃,、易爆、有腐蝕性,、易揮發(fā)的化學試劑。應保持通道暢通,，一旦發(fā)生事故立即切斷電源，并采取相應措施,，抑制事故擴散并及時向園區(qū)及有關部門報告。

第三十九條：非防爆烘箱,、冰箱內(nèi)不得放臵易燃、易爆化學危險品,。

第四十條：實驗室不準使用“熱得快”，不準將電爐用于私人生活,。因?qū)嶒炐枰仨毷褂瞄_式電爐的，需經(jīng)企業(yè)提出申請,、園區(qū)批準并備案。

第四十一條：準用的各類電爐尤其是開式電爐,，必須專人負責，定點使用,，并妥善保管。

第四十二條：使用電爐過程中周圍不準放易燃物,，不準用電爐烘烤衣物，或?qū)⒁挛锱c其他可燃物掛在電爐上方,，使用電爐不準在電爐下面墊木板,，也不要將電爐放在木箱,、紙箱盒內(nèi),。用完后也應立即拔下插頭,，待其溫度下降后才能再存放起來,。若遇停電,，務必及時拔去電爐插頭。

第四十三條：電爐應有專用插座,，不應與其他電器共用一個插座，電爐電線應符合用電標準,，要選擇截面大小得當，絕緣良好的導線,，防止絕緣導線芯裸露和插頭破損。

七 實驗室環(huán)保管理

第四十四條：各企業(yè)要重視實驗室的環(huán)保工作,。定期研究和檢查因高溫、低溫,、輻射、病菌,、噪聲,、毒性,、激光、粉塵,、超凈等可能對人體有害的情況并采取必要措施。危險化學品工作場所應設有急救措施,，并提供應急處理的方法,。強化實驗室的工作環(huán)境和勞動保護,。

第四十五條：實驗室主任要親自抓好環(huán)境管理和勞動保護，健全管理制度和“三廢”處理規(guī)程,。堅持對新來實驗室工作人員實行“先教育后實驗”制度。必要時可設一名兼職環(huán)保工作員,，協(xié)助實驗室主任抓好環(huán)保工作，做好“三廢”處理,。

第四十六條：實驗室應盡量避免選擇“三廢”污染嚴重的實驗。在確立科研項目的同時,，應提出有效的“三廢”治理方法；對沒有妥善處理“三廢”的實驗室應予停開,，或另選流程。消除,、減少和控制工作場所危險化學品產(chǎn)生的危害應通過下列方法：

⑴ 選用無毒或低毒的化學替代品。

⑵ 選用可將危害消除或減少到最低程度的技術,。

⑶ 采用能消除或降低危害的工程控制措施（如隔離、密閉等）,。第四十七條：實驗室要嚴格遵守國家環(huán)境保護工作的有關規(guī)定，不隨意排放廢氣,、廢液、廢物,，不得污染環(huán)境。

第四十八條：根據(jù)“誰污染,、誰治理”原則，實驗室對少量酸堿廢液,，應加以中和,，符合廢液排放要求后排放,。對其它無機廢液應作預處理，使有害物質(zhì)沉淀,，廢液符合排放要求后排放。對含銀,、含鉻或其它含貴金屬、重金屬的廢液,，應分別儲存，盡量回收利用,。

第四十九條：實驗室對有機溶劑等廢液，應分別收集并交由簽約的廢液收集機構(gòu),，集中處理的廢液桶（瓶）必須加蓋，并將填好的廢液收集單其中一聯(lián)貼在容器上,。對少數(shù)不能按要求歸大類儲存的廢液、試劑瓶,，必須裝入木箱,、柳條箱,，每瓶貼好聯(lián)單,，征得收集機構(gòu)同意后方可接受處理。對需處理的化學試劑空瓶也必須裝入木箱、柳條箱,。對遇潮,、遇水容易起化學反應及性質(zhì)不穩(wěn)定,、易分解變質(zhì)的化學藥品和一級易燃化學品應事先登記預約，集中處理,。

第五十條：實驗過程中如遇產(chǎn)生有害氣體，應盡力在通風櫥內(nèi)或通風罩下進行,，如有害氣體的氣量較大時，應采取措施,，加以吸收。

第五十一條：對散發(fā)有害氣體或粉塵的實驗設備,，應盡可能安裝通風、吸塵等措施,。

第五十二條：實驗室在使用產(chǎn)生噪聲設備時，必須采取消音,、隔離措施，使噪音降低到規(guī)定以下,。

第五十三條：實驗室廢水分成兩部分管理：對低濃度的經(jīng)無害化處理的廢水可由下水道進入污水處理站；對高濃度易燃有害的廢液須采取分類集中外送處理,。

八 保持實驗室場所的整潔

第五十四條：實驗室應建立天天有衛(wèi)生值日或?qū)Ｈ舜驋咧贫?，做到每天一小掃,，每周一大掃,，每月徹底掃,。保持實驗室窗明幾凈，無垃圾,、無痰跡、無蛛網(wǎng)、無積灰,、無蟑螂、無雜物,，實驗臺、凳,、櫥、柜,、儀器、設備,、瓶子放臵整齊、清潔,。

第五十五條：實驗室內(nèi)不準存放私人物品。實驗大樓公共場所不準亂堆放廢液,、空瓶罐等物品。

第五十六條：文明使用公共廁所,。嚴禁將碎玻璃,、骨頭,、茶葉渣,、塑料紙等易堵雜物倒入馬桶或小便槽中。

九 加強實驗室搬遷,、調(diào)整過程中的安全環(huán)保管理 第五十七條：各企業(yè)實驗室在搬遷、調(diào)整過程中,，必須遵從“誰主管，誰負責”的原則,，強化主體責任,，保證安全,、文明搬遷和人員文明離園,。杜絕各類安全隱患,，保持良好的環(huán)境衛(wèi)生。

第五十八條：搬遷,、調(diào)整過程中涉及鋼瓶、壓力容器等特種設備,，必須歸屬明確、責任到人,。

第五十九條：搬遷、調(diào)整過程中涉及化學品,，尤其危險化學品除注意安全遷移外，不得隨意丟棄,、遺留。處臵廢棄化學品必須按照“誰使用,，誰管理”、“誰污染,，誰治理”的原則，對廢棄化學品亂丟,、亂倒或遺留不管者，將嚴肅處理,。

第六十條：搬遷、調(diào)整過程中難以及時處臵的廢棄化學品,，應送市內(nèi)有專業(yè)處理資質(zhì)的單位處理,，但費用自理。

十一 實行獎懲,，賞罰分明 第六十一條：實驗室如發(fā)生安全事故，應積極采取措施及時處理,，減少損失，并按規(guī)定立即上報,，不許隱瞞或拖延不報，重大事故應保護好現(xiàn)場,。

第六十二條：對認真執(zhí)行本規(guī)范，遵章守法,、措施落實、無事故,、無違章、環(huán)境整潔的實驗室,，各企業(yè)應給予表揚和獎勵,，事跡突出，成績顯著的園區(qū)定期予以表彰,。

第六十三條：對違反本規(guī)范者，要給予批評教育,，限期整改。對玩忽職守,，嚴重違反本規(guī)范及有關規(guī)定、造成事故,、發(fā)生人員受傷和經(jīng)濟損失的，園區(qū)將根據(jù)情節(jié)輕重,、損失大小，提請有關部門分別給予批評,、經(jīng)濟處罰或行政處分,，直至依法追究刑事責任,。

華東理工科技園 二〇一四年一月一日

實驗室工作規(guī)程 實驗室工作要求篇三

1、目的

為了營造一個安全有效,、秩序良好的實驗室環(huán)境，達到“科學,、規(guī)范,、安全、高效”的目的,，特制訂本實驗室管理規(guī)定。

2,、適用范圍 規(guī)定適用于進入實驗室內(nèi)所有人員。

3,、實驗室管理人員職責

負責公司新產(chǎn)品研發(fā)實驗、調(diào)試,、驗證和測試等研發(fā)任務。3．1實驗室負責人 3．1．1負責實驗室日常管理,，組織安排測試任務順利進行；

3．1．2負責管理實驗室業(yè)務流程,，指導分析人員及時、準確的完成各項分析工作,；

3．1．3負責實驗室質(zhì)量控制，維護實驗室質(zhì)量體系,，審核、監(jiān)控測試數(shù)據(jù)和結(jié)果,；

3．1．4負責實驗室安全檢查與突發(fā)事件處理,；

3．1．5負責監(jiān)督檢查實驗室日常衛(wèi)生,，有權(quán)安排本實驗室所有相關人員嚴格執(zhí)行實驗室日常衛(wèi)生制度。

3．1．6負責儀器設備的驗收和臺帳建檔工作,；

3．1．7負責儀器設備的使用、維護,、期間核查和周期檢定； 3．1．8負責儀器設備在檢定周期內(nèi)使用和檢驗標識的管理,；

4、實驗室管理辦法

4．1實驗室工作人員必須嚴格遵守國家安全法規(guī)和公司有關制度,，確保安全文明從事研發(fā)工作。

4．2實驗室出口,、走廊是安全通道，任何時候應保持暢通,。實驗室配置的滅火器,、消防砂,、消防水帶等供消防使用,，任何部門或個人不能隨便移動或挪作它用。4．3實驗室要保持整潔,、安靜，物品擺設要整齊,、規(guī)范、科學,，做好四防、五

設備）,。

4．4所有進入實驗室的人員應服從實驗室管理人員安排,，采取必要安全措施，保證人身及儀器設備的安全,。

4．5實驗室的儀器設備，未經(jīng)管理人員許可,，任何人不得擅自開關、使用和移動實驗室中的任何設備,。

4．6對于有規(guī)定的預熱時間的儀器設備，使用設備的人員必須提前預熱登記,。4．7不得將與實驗無關人員帶入實驗室。

4．8由于責任事故造成儀器設備的損壞,，要追究使用人的責任,。

5、實驗室安全管理制度

5．1實驗室應制定相應實驗室規(guī)則及實驗室安全制度,。根據(jù)本實驗室情況制定嚴格的操作規(guī)程及防火、防盜管理制度,，實驗室內(nèi)部人員要嚴格執(zhí)行。進入實驗室的外來人員都必須遵守實驗室有關的規(guī)章制度,。

5．2實驗室工作人員及參加實驗的人員必須認真學習實驗儀器的安全技術操作規(guī)程，熟悉各儀器使用方法及注意事項,。

5．3所有藥品、試劑都有指定位置,，藥品、試劑使用和購買后要放入指定位置,，各種藥品、試劑要有正確清晰的標簽,包括名稱,、濃度,、規(guī)格等,，按正確方法取用。

5．4實驗室應指定專人負責實驗室設備及人身的安全,。負責本室的安全技術監(jiān)督、檢查工作,；對于貴重精密儀器設備、危險物品,，應由具有業(yè)務能力的專人負責操作。

5．5來實驗室工作的人員,，必須有實驗室工作人員在場或經(jīng)過上機操作培訓與

實驗人員進入實驗室應穿著實驗服。與實驗室工作無關的人員不得擅自進入實驗室,，外單位來訪人員如需進入實驗室，必須經(jīng)實驗室負責人批準同意后,，才能進入實驗室。

5．6不得在實驗室飲食,、娛樂，使用化妝品,，實驗室操作用的玻璃容器、器皿不能用來盛載食物和飲料,，實驗室的冰箱、冰柜不可存放食物,。

5．7實驗室及走廊禁止吸煙，特別是在有易燃,、易爆的試劑氣體場所或做有關實驗時，嚴禁煙火。

5．8實驗工作結(jié)束后,，必須關好電源、儀器開關,。下班前，實驗室負責人必須檢查操作的儀器及整個實驗室的門,、窗和不用的水、電,、氣路,，并確保關好,。清掃易燃的紙屑等雜物,，消滅隱患。確認安全無誤,，方可離室,。節(jié)假日前各室人員應進行安全檢查,，確保實驗室安全,。

5．9若儀器設備在運行中，實驗人員不得離開現(xiàn)場,。對需要長時間連續(xù)進行的化學實驗，必須派兩人輪流替換照看,。實驗使用過后廢液、廢碴應按規(guī)定收集,、排放或到指定地點進行處理，禁止將廢溶劑,、反應廢液向下水道傾倒,。5．10對危險性大的化學反應,，如易爆、劇毒等,，要經(jīng)過上級批準，在安全防范措施具備的條件下進行,。在進行有毒、有害,、有刺激性物質(zhì)、有腐蝕性物質(zhì)操作或開展易燃等化學實驗時,，應戴好防護手套、防爆面具,、防護鏡，此類實驗操作必須確保兩人以上,。

5．11實驗室根據(jù)實際情況，配備一定數(shù)量的消防器材,，消防器材要擺放在明顯、易于取用的位置,，并定期檢查,，確保有效,，嚴禁將消防器材移作別用,。實驗室人員必須熟悉常用滅火器材的使用。如遇火警,，除應立即采取必要的消防措施滅火外，應馬上報警，并及時向上級報告,。火警解除后要注意保護現(xiàn)場,。

．12稀釋硫酸時,必須在硬質(zhì)耐熱燒杯或錐形瓶中進行,只能將濃硫酸慢慢注入水中,邊倒邊攪拌,溫度過高時,應等冷卻或降溫后再繼續(xù)進行,嚴禁將水倒入硫酸中。

5．13開啟易揮發(fā)液體試劑前,先將試劑瓶放在自來水流中冷卻幾分鐘,。開啟時瓶口不要對人。

4,、易燃溶劑加熱時,必須在水浴中進行,避免明火。5．14裝強腐蝕性,、有毒或易爆物品的器皿,應由操作者親自洗凈,。

5．15移動,、開啟大瓶液體藥品時,不能將瓶直接放在水泥地板上,最好用橡膠墊或草墊墊好,如為石膏包封的用水泡軟后打開,嚴禁錘砸,敲打,以防破裂,。5．16用試管加熱液體時,不可將管口對人, 以免濺出傷人。

5．17將玻璃棒,玻璃管,溫度計等插入或拔出膠塞膠管時均應墊有棉布, 不可強行插入或拔出,以免折斷傷人,。

5．18嚴格實驗室鑰匙的管理，鑰匙的配發(fā)應由有關負責人統(tǒng)一管理,，不得私自借給他人使用或擅自配置鑰匙。

5．19如有盜竊和事故發(fā)生,，立即采取措施,，及時處理,，必須按規(guī)定上報，不準隱瞞不報或拖延上報,，重大事故要立即搶救，保護事故現(xiàn)場。

5．20因人為原因造成實驗室事故的,，按有關規(guī)定對當事人進行紀律處分，并根據(jù)情節(jié)輕重追究有關人員的經(jīng)濟和法律責任,。

6、儀器安全管理制度 6． 1儀器設備的管理

6．1．1儀器設備購入,、驗收合格后，由管理員辦理入庫,、出庫手續(xù)，并建立《儀器設備臺帳》,。

6．1．2儀器設備有檢定規(guī)程，有授權(quán)檢定機構(gòu)的儀器設備,，應送授權(quán)的法定計量檢定機構(gòu)檢定或校準；沒有檢定規(guī)程的儀器設備,，由實驗室按自校或互校方法

6．1．3經(jīng)驗收合格,，并具有計量器具許可證（帶cmc標志）、樣機試驗報告,、出廠合格證或檢測報告（鑒定證書）的測量儀器，應在儀器上加貼合格或準用標志,，方可批準啟用,。

6．1．4管理員至少每年兩次對測量設備進行核查,。

6．1．5復檢（校）后的檢定（校準,、檢測）證書或報告原件存入儀器設備檔案，向使用者提供復印件,。6． 2儀器設備的使用與操作

6．2．1儀器設備由專人負責人保管,。

6．2．2操作者必須掌握所用儀器設備工作原理,、技術性能、操作規(guī)程,、維護保養(yǎng)等技能。

6．2．3實驗室儀器藥品清整歸位,，檢查實驗儀器是否運作正常，無灰塵蛛網(wǎng)及污垢,，對量筒，燒杯等易碎易裂之儀器應清點其數(shù)量,，并呈報廢數(shù)，根據(jù)清點結(jié)果,，對損壞或缺失儀器藥品進行報修，并及時請購,。

6．2．4每臺儀器設備必須按照校準規(guī)范，監(jiān)測/檢測規(guī)范,、使用說明書等制定作業(yè)指導書。

6．2．5貴重儀器設備的使用者應填寫儀器設備使用記錄表,，其內(nèi)容應包括：使用時間、開機目的,、使用前后及使用過程狀況、使用人,。

6．2．6凡經(jīng)過記載有錯誤、或顯示的結(jié)果有疑問,、或通過檢定等方法證明儀器設備有缺陷時,，應立即停止使用,，并對其加以明確停用標識，如可能將其貯存在規(guī)定的地方直至修復,；修復的儀器設備必須經(jīng)校準、檢定（驗證）或檢定證明其功能指標已恢復,。

．3儀器設備的維護與維修

6．3．1實驗室所有儀器設備應得到正常維護，儀器設備應由專門人員按使用說明書和維護程序的要求給予維護,。

6．3．2送檢的監(jiān)測儀器設備取回驗收后，應給予維護和檢查,。

6．3．3儀器設備應建立儀器設備使用維修檔案，記錄設備投入使用以來運行狀況,、包括交接、檢定,、校準,、使用情況,、故障,、維修等所有信息。

6．3．4長期不用的儀器設備每周開機通電半小時,，以達到除濕的目的，或以其它方式定期維護保養(yǎng),，使它們一直處于良好狀態(tài)。

7,、化學危險物品、易燃易爆劇毒物品管理制度

7．1本制度所稱化學危險物品,、易燃易爆劇毒物品，是指國家標準gb/t12268-90《危險貨物品名表》中所列的各種化學危險性,、易燃,、易爆和劇毒的氣體、液體,、固體。

7．2化學危險物品,、易燃易爆劇毒物品由專人管理，管理員要具備保密意識,，不得隨意將易燃易爆、劇毒物品,、化學藥品的名稱、數(shù)量,、性能告知他人。7．3化學危險物品,、易燃易爆劇毒物品必須單獨存放。

7．4各種盛裝有毒化學物品的容器,，一律要有標志明顯的“毒物”字樣，并使標志向外,。

7．5化學危險物品、易燃易爆劇毒物品在入庫時,，管理人員必須檢查登記,，并建立詳細帳冊,，包括總帳,、明細帳、領用審批單,、領用記錄冊。

7．6劇毒物品要專人專柜保管,，準確登記用量,，使用時應妥善保管，嚴格處理廢液,，防止中毒事故,。劇毒化學藥品庫,，應備有專用的稱量工具,。劇毒化學物品必須放于密閉的金屬或玻璃容器內(nèi)，稱量工作須有人在旁監(jiān)護,，并應在通風櫥中

使用。如未用完,，應返回。

7．7使用場所應保持清潔和通風良好,，工藝裝備應盡量密封，工作時要穿戴好個人防護用具,，如發(fā)現(xiàn)有故障時，應及時報告領導處理,。

7．8劇毒物品，除按上述規(guī)定外,，還有下列要求：使用人員應熟知性質(zhì)并需經(jīng)過專門業(yè)務訓練。實驗裝備應在通風櫥內(nèi)進行,，工作前應打開通風,。應配有消毒設施和急救設施,。劇毒物品的使用工具,、容器應為專用,，用完后消毒,。皮膚有破損的人員，嚴禁操作劇毒物品,。劇毒物品的溶糟應有通風裝置，非操作時間應加蓋加鎖,。經(jīng)過劇毒物品溶液處理過的工具，應用清水沖洗,，并放在通風的地方。7．9化學危險物品,、易燃易爆劇毒物品自然失效，需要報廢,，管理人員必須事先提出請示申請。經(jīng)主管部門審核,、查驗、確認可以報廢時,，由主管領導簽字，做好帳冊登記,，方可報廢。

7．10對不按規(guī)定使用,、存放化學危險物品,、易燃易爆劇毒物品的,，要視情節(jié)給予教育,、處罰、限期整改，由此引發(fā)事故的,，追究當事人責任。對因工作不慎,、管理不當，造成不良后果的管理人員,，要追究其責任。

8,、衛(wèi)生工作制度 8．1實驗室衛(wèi)生管理按定人定區(qū)域劃分,，實行片區(qū)負責制。

8．2實驗室工作必須保持嚴肅,、嚴密、嚴格,、嚴謹；室內(nèi)保持整潔有序,，不準喧嘩、打鬧,、抽煙。

8．3嚴格衛(wèi)生責任制,，各實驗室應有專人負責衛(wèi)生管理工作，室內(nèi)衛(wèi)生要定期打掃,，保持實驗室窗明臺凈、地面無可見污漬,、儀器擺放整齊、實驗臺面一塵不染,。每日實驗結(jié)束后清理廢物桶和水池管道，防止堵塞和腐蝕。實驗完畢,應立即進行清潔整理,，將使用儀器清洗干凈，玻璃儀器放入烘箱干燥,，物歸原處,將

實驗臺,，通風櫥整理干凈,。

8．4實驗室工作人員上崗操作時,，應按相關規(guī)定佩戴標識、穿著實驗服,、帽。8．5實驗中產(chǎn)生的“三廢”按相關規(guī)定妥善處理,，劇毒廢棄物由實驗室統(tǒng)一處理，不得私自傾倒,。

8．6實驗用過的儀器應及時清潔干凈，放回指定位置,，化學藥品歸藥品室，不得滯留現(xiàn)場,。

8．7實驗室、門口及走廊不準堆放雜物,，要求整潔通暢。保證實驗室恒溫（20～25℃）,、恒濕（相對濕度65～85％）無塵、無震動,、通風良好,。

9,、本管理規(guī)定自至下發(fā)之日起執(zhí)行。

實驗室工作規(guī)程 實驗室工作要求篇四

蘇州嘉吉生物技術有限公司

實驗室工作規(guī)范

一,、實驗室應保持清潔規(guī)范。實驗儀器和用具應合理安放,。工作期間應盡量保持實驗臺桌的干凈,，實驗后應及時清理廢棄的實驗用品如廢試劑,、廢器材、濾紙,、移液槍頭等。要保持實驗臺桌和實驗區(qū)間的整潔,。

二、實驗設備和儀器應嚴格按照操作規(guī)程操作,，嚴禁違反操作,。

三、實驗后的可重復使用物品,，基本上以誰操作誰清洗原則，當天使用當天清洗處理,，不留過夜。

四,、實驗室的衛(wèi)生工作可實行互相監(jiān)督管理。

實驗室工作規(guī)程 實驗室工作要求篇五

為使基因擴增檢驗技術有效地應用于臨床,，更好地為疾病的預防,、診斷和治療服務，保證檢驗質(zhì)量,，特制定本規(guī)范,。

一,、臨床基因擴增檢驗實驗室的規(guī)范化設置及其管理

臨床基因擴增檢驗實驗室的規(guī)范化設置詳見《臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法》(衛(wèi)醫(yī)發(fā)

[2002]10號文)附件《臨床基因擴增檢驗實驗室基本設置標準》。為避免污染，必須嚴格遵循《臨床基因擴增檢驗實驗室設置標準》設置臨床基因擴增檢驗實驗室,。

臨床基因擴增檢驗實驗室四個隔開的工作區(qū)域中每一區(qū)域都須有專用的儀器設備。各區(qū)域都必須有明確的標記,，以避免設備物品如加樣器或試劑等從其各自的區(qū)域內(nèi)移出從而造成不同的工作區(qū)域間設備物品發(fā)生混淆。進入各個工作區(qū)域必須嚴格遵循單一方向順序,，即只能從試劑貯存和準備區(qū)、標本制備區(qū),、擴增反應混合物配制和擴增區(qū)(簡稱擴增區(qū))至產(chǎn)物分析區(qū)，避免發(fā)生交叉污染,。在不同的工作區(qū)域應使用不同顏色或有明顯區(qū)別標志的工作服，以便于鑒別,。此外，當工作者離開工作區(qū)時,，不得將各區(qū)特定的工作服帶出。

清潔方法不當也是污染發(fā)生的一個主要原因,，因此實驗室的清潔應按試劑貯存和準備區(qū)至擴增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進行。不同的實驗區(qū)域應有其各自的清潔用具以防止交叉污染,。

(一)試劑貯存和準備區(qū)

下述操作在該區(qū)進行：貯存試劑的制備,、試劑的分裝和主反應混合液的制備,。

貯存試劑和用于標本制備的材料應直接運送至試劑貯存和準備區(qū),，不能經(jīng)過產(chǎn)物分析區(qū)。在打開含有反應混合液的離心管或試管前,，應將其快速離心數(shù)秒。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑,。當貯存試劑溶液經(jīng)檢查可用后,，應將其分裝貯存?zhèn)溆茫苊庥捎诮?jīng)常打開反應管吸液而造成污染,。

含反應混合液的離心管或試管在冰凍前都應快速離心數(shù)秒。大多數(shù)用于擴增的試劑都應冰凍貯存,。為避免因單次反應取液而頻繁的凍融主貯存試劑，應分裝冰凍貯存試劑溶液,。貯存試劑的分裝體積根據(jù)通常在實驗室內(nèi)一次測定所需的擴增反應數(shù)來決定。

主反應混合液的組成成份尤其是聚合酶的適用性和穩(wěn)定性通過預試驗來檢查,，評價結(jié)果必須有書面報告。對于“熱啟動”技術(在第一個高溫變性步驟后加入酶),，聚合酶也可不包含在主反應混合液中。

在整個本區(qū)的實驗操作過程中,，操作者必須戴手套，并經(jīng)常更換,。此外,，操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施,。

嚴禁用嘴吸取液體,，加樣器和吸頭等必須經(jīng)高壓處理。

工作結(jié)束后必須立即對工作區(qū)進行清潔,。本工作區(qū)的實驗臺表面應可耐受諸如次氯酸鈉的化學物質(zhì)的消毒清潔作用。實驗臺表面的紫外照射應方便有效,。由于紫外照射的距離和能量對去污染的效果非常關鍵，因此可使用可移動紫外燈(254nm波長),，在工作完成后調(diào)至實驗臺上60~90cm內(nèi)照射,。由于擴增產(chǎn)物僅幾百bp,，對紫外線損傷不敏感，因此紫外照射擴增片段必須延長照射時間,，最好是照射過夜。實驗室及其設備的使用必須有日常記錄,。

(二)標本制備區(qū)

下述操作在該區(qū)進行：臨床標本的保存，核酸(rna,、dna)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定rna時cdna的合成,。

要正確使用加樣器。由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染,，所以應避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動?？赏ㄟ^在本區(qū)內(nèi)設立正壓條件避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。為避免樣本間的交叉污染,，加 1

入待測核酸后，必須蓋好含反應混合液的反應管,。對具有潛在傳染危險性的材料，必須有明確的樣本處理和滅活程序,。

用過的加樣器吸頭必須放入專門的消毒(例如含次氯酸鈉溶液)容器內(nèi)。實驗室桌椅表面每次工作后都要清潔,，實驗材料(原始血標本、血清標本,、提取中的標本與試劑的混合液等)如出現(xiàn)外濺,，則必須分別處理并作出記錄,。

對實驗臺適當?shù)淖贤庹丈?254nm波長，與工作臺面近距離)適合于滅活去污染,。可移動紫外線管燈可用來確保工作后對實驗臺面的充分照射,。

樣本處理對核酸擴增有很大影響，必須使用有效的核酸提取方法,，可在開展臨床標本檢測前對提取方法進行評價。

用于rna擴增檢測的樣本制備好以后,，應立即進行cdna合成,，因為cdna鏈較rna穩(wěn)定,，保存相對容易,。為保證逆轉(zhuǎn)錄反應的需要，應在標本制備區(qū)設置一個以上的溫育裝置,。

cdna合成的理想溫度依所使用的酶而定，傾向于使用一步法：即使用在擴增反應緩沖液條件下具有逆轉(zhuǎn)錄活性的熱穩(wěn)定的dna聚合酶進行逆轉(zhuǎn)錄,，其較cdna合成后再開蓋以調(diào)節(jié)緩沖液或加入聚合酶進行擴增發(fā)生污染的可能性降低。

待測rna的cdna拷貝須保存在標本制備區(qū),，不得在本區(qū)對樣本進行pcr擴增。

(三)擴增區(qū)

下述工作在本區(qū)內(nèi)進行：dna或cdna擴增,。此外,，已制備的dna模板和合成的cdna(來自樣本制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。在巢式pcr測定中,，通常在第一輪擴增后必須打開反應管,，因此巢式擴增有較高的污染危險性,，第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進行,。

不能從本區(qū)再進入任何“上游”區(qū)域,，可降低本區(qū)的氣壓以避免氣溶膠從本區(qū)漏出,。

為避免氣溶膠所致的污染，應盡量減少在本區(qū)內(nèi)的走動,。如有加樣則應在超凈臺內(nèi)進行。打開預處理過的反應混合液時必須防止液體濺出,，尤其是在巢式擴增步驟之間。一個簡單的方法是在打開反應管前快速離心數(shù)秒,。可使用體積較小的離心機,，因其所占實驗臺面小，易于用一只手操作,，適合于大多數(shù)超凈臺。防潮屏障如石蠟油或輕礦物油也具有防污染作用,，但必須注意的是,，礦物油本身也可能成為一種持續(xù)性的污染源,。用過的加樣器必須注意清潔消毒,。

完成操作及每天工作后都必須對實驗室臺面進行清潔和消毒，紫外照射方法與前面區(qū)域相同,。如有溶液濺出，必須處理并作出記錄,。

(四)擴增產(chǎn)物分析區(qū)

下述操作在本區(qū)內(nèi)進行：擴增片段的測定。

核酸擴增后產(chǎn)物的分析方法多種多樣,，如膜上或微孔板上探針雜交方法(同位素標記或非同位素標記),、瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳,、southern轉(zhuǎn)移、核酸測序方法等,。目前國內(nèi)的商品試劑盒絕大部分均采用非同位素標記的微孔板上探針雜交方法，即pcr-elisa方法,，也有膜上探針雜交方法。

本區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源,，因此必須注意避免通過本區(qū)的物品及工作服將擴增產(chǎn)物帶出。在使用pcr-elisa方法檢測擴增產(chǎn)物時,，必須使用洗板機洗板，廢液必須收集至1mol/l hc1中,，并且不能在實驗室內(nèi)傾倒，而應至遠離pcr實驗室的地方棄掉,。用過的吸頭也必須放至1mol/l hcl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序處理,，如焚燒,。

由于本區(qū)有可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)如溴化乙錠,、丙烯酰胺、甲醛或同位素等,，故應注意實驗人員的安全防護。

本區(qū)的清潔消毒和紫外照射方法同前面區(qū)域,。本區(qū)如采用負壓條件或減壓情況下(如安裝排風扇)可減少擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至前面區(qū)域的可能性。

二,、臨床基因擴增檢驗實驗室質(zhì)量保證

臨床基因擴增檢驗實驗室質(zhì)量保證涉及到整個基因擴增檢驗的所有階段，即測定分析前的標本采集處理,、測定中的核酸提取、擴增和產(chǎn)物分析以及測定后的結(jié)果報告等,。

(一)標本的采集

常用于基因擴增檢測的臨床標本包括edta或枸櫞酸鈉抗凝全血或骨髓,、血清或血漿,、痰,、腦脊液、尿及分泌物等,。采血液等樣本時，應使用一次性密閉容器,，如真空采血管。當使用非密閉采樣系統(tǒng)時,，如尿、分泌物和骨髓的采樣,，必須注意防止來自采樣者的皮屑或分泌物的污染,。采樣時必須戴一次性手套,。玻璃器皿在使用前應高壓處理，因為玻璃器皿常含有不易失活的rna酶,。最好是熱滅菌，250℃烘烤4小時以上可使rna酶永久性失活,。

全血和骨髓標本必須進行抗凝處理。edta和枸櫞酸鹽是首選的抗凝劑,。不能使用肝素抗凝，因為肝素是taq酶的強抑制劑,，而且在其后的核酸提取步驟中很難去除。

臨床用于rna(如hcv rna)擴增檢測的血標本建議進行抗凝處理，并盡快(3小時以內(nèi))分離血漿,，以避免rna的降解。如未作抗凝處理,，則抽血后，必須在1小時內(nèi)分離血清,。

(二)標本的穩(wěn)定化處理

用于dna擴增檢測的標本，采集后一般不需要特殊的穩(wěn)定化處理,，但標本應及時送至實驗室,。由于rna易受rna酶的降解,，因此用于rna測定的標本有時必須進行穩(wěn)定化處理，如流行病學調(diào)查的現(xiàn)場采樣,。異硫氰酸胍鹽(guanidine thiocyanate,gitc)可使dna酶和rna酶立即失活，因此在采集標本時,，可將標本材料如血清或血漿按1:4的比例加至含有5mol/l gitc的試管中，從而使血清(漿)中的rna酶不可逆失活,。經(jīng)上述穩(wěn)定化處理后，標本一般不需要冷藏即可郵寄,。對于特定的檢測項目，上述穩(wěn)定化處理方法的效果究竟如何,，要使用相應的逆轉(zhuǎn)錄pcr測定方法來評價。

(三)標本的運送

標本采集后必須盡快送至實驗室,。經(jīng)過適當穩(wěn)定化處理的標本可在常溫下通過郵寄運送。如用于dna擴增檢測的edta抗凝全血標本及用于rna擴增檢測的經(jīng)gitc穩(wěn)定化處理的標本,。通常在運送時，應采用不易破碎的容器裝載標本,。用于rna檢測的標本,，如果未經(jīng)穩(wěn)定化處理，則必須速凍后,，放在干冰中運送。

(四)標本的貯存

臨床體液標本如血清/血漿等可于-70℃下長時間貯存,。用于dna測定的已純化核酸樣本可在10mmol/l tris-1 mmol/l edta緩沖液(ph 7.5-8.0)中4℃保存,。用于rna測定的已純化核酸樣本應在緩沖液中-80℃或液氮中貯存,。用乙醇沉淀的核酸樣本貯存在-20℃即可,。用gitc處理的rna標本在室溫可保存7天,。

(五)標本的處理(核酸提取)

標本處理即核酸提取純化是決定擴增檢測成敗的關鍵性步驟，在使用商品核酸提取試劑提取臨床標本中的核酸模板前,，應對其進行充分評價以驗證其提取的有效性。通常,，核酸制備質(zhì)量不高是由于抑制物去除不完全所致，抑制物可能來源于標本本身(如血紅素及其前體或降解產(chǎn)物)或核酸提取過程中殘留的有機

溶劑(如酚,、氯仿等)，這些物質(zhì)對其后的taq酶擴增反應步驟具有強烈的抑制作用,，從而影響靶核酸的擴增測定。當標本為痰時,，則必須先進行液化處理,，再提取核酸,。需注意的是,，液化時不能加熱，液化時間不能過長,。此外，當靶核酸為rna時，逆轉(zhuǎn)錄pcr測定失敗的常見原因是標本在運送前未經(jīng)充分的穩(wěn)定化處理及核酸提取試劑的rna酶的污染,。對于前者，要核查測定分析前的步驟,，如果發(fā)現(xiàn)有rna降解的證據(jù)，實驗室則應拒絕接受標本,，要求重新采取標本,，并對運送者給以詳細的指導,。對于后者，建議使用高質(zhì)量的商品核酸提取試劑,。

(六)靶核酸的逆轉(zhuǎn)錄(rt)和擴增

1、靶rna的逆轉(zhuǎn)錄

cdna合成為逆轉(zhuǎn)錄pcr中的第一個酶反應步驟,，所產(chǎn)生的cdna為靶rna的反向互補鏈，為后面擴增的模板,。下述因素通常影響cdna合成的效率：(1)逆轉(zhuǎn)錄效率的降低或完全缺乏。其可能的原因有逆轉(zhuǎn)錄酶質(zhì)量不高,、試劑降解變質(zhì)或加樣錯誤等；(2)用于逆轉(zhuǎn)錄的標本中存在逆轉(zhuǎn)錄或taq酶的抑制物(如酚,、氯仿、血紅素等),；(3)rna酶的存在導致rna的降解,。

2,、核酸的擴增

有多種因素可引起核酸擴增檢測的假陽性或假陰性結(jié)果,，如擴增靶核酸中抑制劑存在、taq酶失活,、退火溫度不對,、mg++濃度不佳、患者標本或試劑受污染等,。擴增儀孔中熱傳導的均一性極為重要，必須定期對擴增儀的溫度控制和加熱模塊中熱傳導的一致性進行檢查,，以避免假陰性結(jié)果。

(七)污染

在實際工作中,，常見有以下幾種污染類型：擴增片段的污染(產(chǎn)物污染)；天然基因組dna的污染,、試劑污染(貯存液或工作液)以及標本間交叉污染(如氣溶膠從一個陽性標本擴散到原本陰性的標本),。臨床基因擴增檢驗實驗室中污染的最主要來源是擴增產(chǎn)物的污染,。

由于一旦發(fā)生污染后，再圍繞實驗室來尋找污染源不僅耗時而且還很繁瑣,，所以防止污染重在預防。但如果發(fā)生了污染,，實驗就必須停止，直到發(fā)現(xiàn)了污染源為止,，并且實驗結(jié)果必須作廢,。

1,、測定分析前的污染源

測定分析前實驗材料的污染主要來自非病人標本來源的核酸,。

2、測定分析階段的污染源

通常,，測定分析階段的每一步都可能發(fā)生對樣本的污染。反應混合液的任何成分及核酸的制備和反應建立階段所涉及到的實驗設備的任何部位都是可能的污染源,。如受污染的試劑(例如牛血清白蛋白，明膠或礦物油),、商品酶制劑,、消耗品(如反應管，吸頭)和實驗設備(如加樣器,、離心機)等。

在前面三個工作區(qū)中,，不當?shù)膶嶒灢僮鲿鹚褂玫脑噭⑾钠坊驅(qū)嶒炘O備的污染,。而在產(chǎn)物分析區(qū),，當吸取擴增產(chǎn)物用于檢測時,，非常容易引起污染,，因此必須制定標準操作程序(sop)，并嚴格執(zhí)行,。

3、污染的避免

要避免污染,，首先應是預防而不是排除污染，前面所述對工作區(qū)的嚴格劃分的目的即是為了預防污染,。為避免以前測定中所產(chǎn)生的擴增產(chǎn)物的污染,，可設法將其破壞掉,。如在擴增反應中用dutp取代部分dttp,，使得產(chǎn)生的特異擴增片段含有尿嘧啶，這樣擴增前在反應混合液中加入尿嘧啶糖苷酶(ung),，可破壞來自以前測定的擴增產(chǎn)物，從而避免其對以后要進行的擴增測定的污染,。另外一種方法是持續(xù)的長波紫外燈照射，通過異補骨脂素光化學產(chǎn)生dna加合物,，由于dna加合物對擴增沒有反應但又不妨礙pcr后雜交過程,，所以這種方法也能防止污染。

上述防污染方法只在一定程度上有效,，所以不能用其來替代嚴格的實驗室設置和管理，尤其是這些方法不能防止外來非擴增的天然dna的污染,。

4、去除污染的措施

工作完后必須定期對實驗室采取有效的去污染措施,，結(jié)合各種不同的方法可達到最佳效果。去污染措施包括但不僅限下面幾種：(1)用10%(v/v)次氯酸鈉清潔表面,；(2)試驗后長時間的紫外照射實驗操作臺面和其他表面；(3)實驗設備如加樣器的高壓消毒,。

(八)擴增產(chǎn)物的分析

擴增產(chǎn)物的測定有各種方法,，如電泳,、限制性酶切,、斑點印跡、探針雜交,、測序,、分光光度法定量等，但臨床pcr檢驗項目基本上都使用探針雜交方法,。

雜交結(jié)果不充分的原因可能是基因探針不合適,、標記方法不對、對探針的標記不夠,、雜交或洗滌方法不合適等,。

最常使用的基因探針有：dna片段、合成的寡核苷酸和體外轉(zhuǎn)錄的反義rna探針,。探針的標記物常用的有生物素,、地高辛、熒光素和同位素等,。

在擴增后的雜交檢測中, 應該嚴格遵守商品試劑盒確定的雜交程序和雜交條件,。溫度太低或離子強度太高都會降低雜交的嚴格性，還會給檢測信號的特異性帶來負面影響,。相反,，提高溫度和/或降低離子強度會增加雜交的嚴格性,。因此，嚴密控制溫度和試劑的離子強度是避免假陽性和假陰性結(jié)果的先決條件,。要注意的是,，溫度和離子強度不能同時改變。

(九)質(zhì)量控制

質(zhì)量控制包括兩個方面,，即室內(nèi)質(zhì)量控制(以下簡稱質(zhì)控)和室間質(zhì)量評價,。

1、室內(nèi)質(zhì)量控制

必須對dna和rna分析的各步進行質(zhì)量控制,，以避免假陽性和假陰性,，保證測定結(jié)果的準確性和重復性。由于核酸擴增測定的高敏感性,，所以標本制備,、逆轉(zhuǎn)錄、擴增本身和產(chǎn)物分析中的每一步都要求有質(zhì)控措施,。

(1)標本制備：

常用瓊脂糖凝膠電泳來檢測dna提取效果,，以判斷所提取的dna是否發(fā)生降解。用常規(guī)的手工提取方法制備的dna的平均長度一般為~100kb,，用適合pcr的dna提取試劑盒制備的dna的長度平均范圍為30-40kb,。明顯出現(xiàn)降解的dna(在1和10kb的低分子量范圍內(nèi))在經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分離和用溴化乙錠染色后也可見強的熒光信號。用對甲基化不敏感的限制性內(nèi)切酶(如ecori)消化dna,，然后電泳分離,，能夠?qū)γ富钚缘囊种苿┻M行質(zhì)控(在抑制劑存在的情況下，高分子量的片段不被酶切),。潛在的抑制劑的存在通常用260nm和280nm的分光光度測定來估計,，質(zhì)量好的dna提取物，a260/a280比值應該在1.75~2.0之間;否則,殘留的蛋白或酚可能會很高,。僅用光度計比色方法不能對dna的完整性下結(jié)論,。

最快的對總rna提取質(zhì)量控制的方法是在非變性條件下作瓊脂糖凝膠電泳,這一點跟dna分離相同。但如果對結(jié)果有疑問,就應該在變性的條件下作瓊脂糖凝膠電泳以檢測rna的完整性,。在理想情況下,三種主要的核糖體rna(28s,、18s和5s)在凝膠上出現(xiàn)的帶相對較窄。如發(fā)生rna的降解,，則出現(xiàn)大量低分子量帶或出現(xiàn)帶的消失,。測定核糖體rna帶的密度指數(shù)可作為對rna制備的質(zhì)量評價的實驗室內(nèi)的標準；對向低分子量拖尾的,、不對稱性的峰的評估也是rna完整性的合適的指標,。另外，瓊脂糖凝膠電泳能顯示出在rna的制備中被dna污染的程度,。由于這些原因,，單獨的光度計比色方法也不能對rna的完整性下結(jié)論,。

對于血清（漿）中病毒的測定，則要評價標本出現(xiàn)溶血,、脂血和黃膽情況下標本處理方法對擴增檢測的影響,，避免由于標本處理方法的不當而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。此外,，還可采用已知濃度標本評價核酸提取方法的效果,。

(2)逆轉(zhuǎn)錄和擴增：本部份包括陽性質(zhì)控和陰性質(zhì)控。

對逆轉(zhuǎn)錄和核酸擴增的質(zhì)控既可使用內(nèi)標質(zhì)控方法也可采用外標質(zhì)控方法,。逆轉(zhuǎn)錄-擴增檢測的內(nèi)標通常為在整個細胞周期中均勻表達的mrna,，如hla、β肌動蛋白和組蛋白h3.3的mrna或14s rrna等,。此外,，也可在標本制備時將外來內(nèi)標加入到樣本中共同提取、逆轉(zhuǎn)錄及擴增,。當標本中存在逆轉(zhuǎn)錄抑制物,，或核酸提取中發(fā)生rna降解，或逆轉(zhuǎn)錄酶失活,，內(nèi)標即會表現(xiàn)為陰性結(jié)果,。

對于dna測定內(nèi)標可使用對有機體存活所必須的靶基因，如維生素d血漿結(jié)合蛋白的基因,。對于病原體的基因檢測,，內(nèi)標多采用人工制備的競爭性內(nèi)標。內(nèi)標可以監(jiān)控每一擴增孔中假陰性的產(chǎn)生情況,。

目前的商品試劑盒大部分沒采用內(nèi)標方法質(zhì)控。因此在測定血清/血漿病原體核酸如hbv dna,、hcv rna等時，應使用已知的弱陽性血清/血漿作為質(zhì)控樣本,，與待測臨床標本等同處理提取核酸及擴增，以判斷逆轉(zhuǎn)錄及擴增檢測的效果,。

使用這些外加弱陽性質(zhì)控不但可檢測擴增反應液的質(zhì)量，還可獲得有關pcr試劑的檢測下限和特異性的信息,。這些質(zhì)控樣本在擴增檢測時必須使用與患者的標本相同的主反應混合液。

每一個pcr實驗中都必須設有外加陰性質(zhì)控(污染監(jiān)測質(zhì)控),，為判斷擴增過程中污染出現(xiàn)的階段,，陰性質(zhì)控可包括如下幾種，即在樣品制備的整個過程中所帶的空白管,、僅有擴增反應液但不含擴增模板的反應管、陰性標本等,。陰性標本可以評估pcr實驗的綜合質(zhì)量。

在擴增靶rna的rt-pcr實驗中,，可做省略逆轉(zhuǎn)錄的污染質(zhì)控,，通過這種方法,，可發(fā)現(xiàn)以前擴增的dna片段所引起的污染。

(3)板上雜交和膜上斑點印跡雜交的質(zhì)控：在板上雜交和斑點雜交時,，陽性和陰性質(zhì)控應該在同一板或膜上與病人標本平行進行分析，這可排除不同反應中因使用不同雜交條件所致的對結(jié)果的錯誤解釋,。

(4)測定結(jié)果的評價與報告：采用實時熒光定量pcr檢測方法，在判斷結(jié)果時,，應先對擴增的熒光信號作出定性判斷，然后再進行定量分析,，避免一些非特異熒光信號對結(jié)果分析的干擾。

結(jié)果的報告必須簡單清楚,。定性測定報告“陽性”或“陰性”即可,。定量測定則必須報告量的多少,，如結(jié)果高于測定方法線性范圍上限，則對樣本稀釋后再測,，結(jié)果乘上稀釋倍數(shù)；如結(jié)果低于方法的測定范圍下限,，則報?lt;多少即可，不能報告為“0”或“陰性”。

2,、室間質(zhì)量評價

所有開展臨床基因擴增檢驗的實驗室都必須參加由衛(wèi)生部臨床檢驗中心組織的全國臨床基因擴增檢驗項目的室間質(zhì)量評價，評價結(jié)果將作為其開展臨床基因擴增檢驗的依據(jù)之一,。

本工作規(guī)范自公布之日起實施。