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檢驗專業(yè)考試臨床檢驗基礎知識篇一

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小吞噬細胞的運動可以分成隨機運動和定向運動,，前者類似于布朗運動。檢測方法是將采集的白細胞懸液滴于玻片上,，用光學顯微鏡直接觀察其運動,。也可用毛細血管法將細胞懸液裝入硅化毛細血管中，稍加離心,，使細胞沉積在一端,，切去無細胞的毛細血管段，繼而移放在含細胞培養(yǎng)液的培養(yǎng)小瓶中,，37℃溫育18～20h,，游動的細胞將從毛細血管內(nèi)外移，在管口形成一細胞團,，根據(jù)細胞面積可判斷受檢中性粒細胞活動的強弱,。某些患者中性粒細胞的任意運動明顯減弱，甚至消失,。中性粒細胞的定向運動表現(xiàn)為趨化運動,，測定方法有多種，其原理相同,，而方法大同小異,，常用以下兩法：

小室法又稱濾膜小室法，采用特殊的小盒裝置,，盒中以一片3～5μm孔徑的微孔濾膜將盒分為上下兩小室,。上室加受檢的白細胞懸液;下室加細菌菌體或其產(chǎn)物、酵母菌活化的血清等趨化因子,。置37℃溫育數(shù)小時,。上室中的中性粒細胞因受下室內(nèi)趨化因子的招引，使細胞由濾膜微孔進入濾膜內(nèi),，最后取濾膜,，經(jīng)固定、干燥,、著染,、脫色等步驟，將透明后的濾膜置油鏡下檢測細胞在膜內(nèi)通過的距離,，求其趨化單位,。

2.瓊脂糖凝膠平板法將含小牛血清的1%瓊脂糖傾到在玻片或平皿中制成凝膠平板,，繼而打孔，每三孔為一組,，中央孔加細胞懸液,，兩側孔分別加趨化因子或?qū)φ张囵B(yǎng)液，經(jīng)37℃溫育2～3h后,，用2%戊二醛固定,，移去瓊脂糖層，經(jīng)染色后,，測量細胞運動的距離,，按下式計算移動指數(shù)。

檢測原則是將受檢細胞懸液按一定比例混和,，繼加活的白色念珠菌懸液,，保溫生，加美藍溶液作活體染色,，取樣涂片鏡檢,。如胞內(nèi)白色念珠菌呈藍色，表示該菌已被殺死,，共計100200個細胞,，分別求其吞噬率和殺菌率。

溶細胞法更能直接反映細胞殺菌的情況,，將受檢的.細胞懸液與一定量已經(jīng)新鮮人血清調(diào)理過的大腸桿菌或金黃色葡萄球菌懸液混合后,，置37℃，每隔一定時間取定量培養(yǎng)物,，稀釋后接種固體平板培養(yǎng)基,，37℃培養(yǎng)18h后，計算菌落數(shù),，據(jù)以計算中性粒細胞的殺菌能力,。

正常情況下，對大腸桿菌的殺菌率約為90%,，對金黃色葡萄球菌的殺菌率約為85%.

在臨床常用的硝基四氮唑藍(nbt)還原試驗,，本法用以檢測中性粒細胞的胞內(nèi)殺菌能力,，由于中性粒細胞在殺菌過程中能量消耗劇增,，耗氧量亦隨之相應增加，磷酸己糖旁路代謝活力增強,，葡萄糖6-磷酸氧化脫氫,，此時加入nbt可接受所脫的氫，使原先呈淡黃包的nbt還原成點狀或塊狀甲朊顆粒并沉積在胞漿內(nèi),。

近此年來還采用了新穎的化學發(fā)光法,，中性粒細胞在吞噬經(jīng)調(diào)理的金黃色葡萄球菌過程中,，伴有化學發(fā)光的產(chǎn)生，故可用化學發(fā)光儀測定中性粒細胞的吞噬功能及其代謝活性,。實驗證明全血化學發(fā)光試驗可同時獲得兩種信息,，即中性粒細胞的吞噬功能、代謝活性及受檢血清的調(diào)理功能,。由于中性粒細胞的氧代謝活性與對細胞的吞噬率密切相關,，殺菌能力與發(fā)光強度相平行，因此化學發(fā)光法可檢測細胞殺菌功能,。因此吞噬細胞化學發(fā)光測定法可用以研究中性粒細胞的吞噬功能,，代謝活性和血清調(diào)理功能，它可在生理溫度和中性環(huán)境下測定,，能較好地反映生理條件下吞噬細胞的功能,，具有準確靈敏、樣品用量少,，簡便快速等優(yōu)點,。其敏感性高于nbt還原試驗。

正常小鼠肝中枯否細胞可吞噬清除90%炭粒,，脾巨噬細胞約吞噬清除10%炭粒,，據(jù)此給小鼠定量靜脈注射印度墨汁(炭粒懸液)，間隔一定時間反復取靜脈血,，測定血中炭粒的濃度，根據(jù)血流中炭粒被廓清的速度,，判斷巨噬細胞的功能,。

(二)吞噬功能的檢測

巨噬細胞具有較強的吞噬功能，實驗室常用比細菌大的細胞性抗原作為被吞噬顆粒,，如雞紅細胞,。其檢測原理是將受檢細胞與適量的顆粒抗原混合后,，置37℃保溫0.5～1h,，其間時加振搖，最后離心取測定細胞制成涂片,，染色鏡檢,，分別計數(shù)出吞噬百分比和吞噬指數(shù)。各實驗室應根據(jù)自己的條件建立正常參考值,。

(三)巨噬細胞溶酶體酶的測定

巨噬細胞富含溶酶體酶,，如酸性磷酸酶、非特異性酯酶,、溶菌酶等,，測定這些酶的活性也是衡量巨噬細胞功能的實用指標之一,。

1.酸磷酸酶的測定

(1)硝酸鉛法：本法優(yōu)點是用普通試劑，價格便宜,，一般實驗室均有條件做,，封片后可較長時間保存，并可用電子顯微鏡研究觀察細胞的超微結構,。缺點是細胞必需固定,，而且固定條件要求嚴格，如處理不當酶活性易消失,，反應步驟也較多,。

該法基本原理是在適當?shù)拿感詶l件下，巨噬細胞內(nèi)的酸性磷酸酶能使β甘油磷酸鈉水解成磷酸鹽后,，后者與硝酸鉛反應產(chǎn)生磷酸鉛,，而磷酸鉛再與硫酸銨反應則形成黑色硫化鉛，沉積在胞漿內(nèi)酸所在處,，顯示棕黑色顆粒,。酶活性強弱可根據(jù)顆粒的數(shù)量和粗細不同而分級判斷，顆粒數(shù)量少則細的為+,，顆粒多而粗的為++,，顆粒很多且很粗的為+++。

(2)偶氮法：本法操作簡便,，反應液中的底物α-萘磷酸鈉被酸性磷酸酶分解后,，形成萘酚和磷酸鹽，而萘酚結構中的羥基(-oh)鄰近的活潑碳原子,，立即與偶氮染料起反應,，而產(chǎn)生鮮艷的棕色沉積在酶所在處，缺點是封片后保存時間短,。

2.非特異性酶的測定該酶比較穩(wěn)定,，酶活性喪失較慢，細胞經(jīng)涂片干燥,，置室溫至少可保存半天至一天,，因此特別有利于臨床檢驗室采用。

常用α-萘醋酸法,，該酶可將-萘醋酸分解成萘酚和醋酸,，萘酚迅速與偶染料結合，形成有色反應物而沉積,。

(四)巨噬細胞促凝血活性測定

激活巨噬細胞可產(chǎn)生一種與膜結合的凝血活性因子,，加速正常血漿的凝固，為此取已經(jīng)37℃預溫的正常兔血漿和cac12混合液,，加入經(jīng)粘附單層巨噬細胞的試管中,，移置37℃，即時記錄血漿凝固時間,。實驗證明當巨噬細胞與lps,、腫瘤相關抗原或hbsag等溫育后，可見血漿凝固時間明顯縮短,。本法穩(wěn)定方便,，也是檢測不同疾病患者巨噬細胞功能的指標之一。

(五)巨噬細胞表面受體的檢測

成熟的巨噬細胞表面具有fc受體和c3b受體,，這些受體能識別經(jīng)igg和c3b調(diào)理的顆粒,，并迅速與之結合，促使細胞對相應顆粒的吞噬,，為此檢測這些受體可間接判斷巨噬細胞的功能,。常用抗羊紅細胞致敏的羊紅細胞懸液作指示物進行ea花環(huán)試驗，也可用抗原(e)抗體(a)補體(c)復合物作eac花環(huán)試驗,。由于操作繁鎖,，現(xiàn)僅供研究用。

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